Phương pháp phát hiện 4-metylimidazol bằng HPLC

Theo báo cáo của tờ Financial Times vào ngày 4 tháng 7giải mộng, cơ quan giám sát tại Hoa Kỳ - Trung tâm An toàn Môi trường cho biết rằng trong 10 bang của Mỹ, Pepsi chứa 4-metylimidazol, một chất hóa học liên quan đến ung thư phổi ở động vật có vú. Hiện tại, Trung tâm Đánh giá Rủi ro Quốc gia đang đánh giá xem liệu chất 4-metylimidazol trong màu caramel của Coca-Cola có ảnh hưởng đến sức khỏe con người hay không, và quốc gia này cũng sẽ sửa đổi tiêu chuẩn giới hạn đối với màu caramel. Được biết, trong các tiêu chuẩn hiện hành về chất lượng thực phẩm tại nước ta, không có quy định cụ thể về hàm lượng màu caramel trong Coca-Cola, chỉ yêu cầu sử dụng với liều lượng phù hợp theo nhu cầu sản xuất.

Chất 4-metylimidazol xuất hiện trong quá trình sản xuất màu caramel dùng cho đồ uống. So với các sắc tố nhân tạo khácgiải mộng, màu caramel nổi bật với giá thành rẻ, an toàn và không độc hại, do đó ngày càng được áp dụng rộng rãi trong ngành công nghiệp thực phẩm như nước tương, giấm, Coca-Cola và đồ lạnh. Tuy nhiên, trong quá trình chế biến, thường sử dụng amoniac hoặc muối amoni, khi kết hợp với các nguyên liệu phụ, chúng tạo ra sản phẩm phụ là 4- Đây là chất độc thần kinh có khả năng gây co giật. Việc tiêu thụ lâu dài có thể dẫn đến ung thư ở động vật, và có nguy cơ gây ung thư ở người. Theo báo Daily Mail của Anh, tổ chức phi lợi nhuận tại Mỹ đã kiểm tra hàm lượng 4-metylimidazol trong Coca-Cola ở nhiều quốc gia và phát hiện ra rằng trong 355 ml Coca-Cola của Mỹ có khoảng 4 microgam, Trung Quốc có 56 microgam, Anh có 135 microgam và Brazil thậm chí lên tới 267 microgam.

Coca-Cola gây ung thư

Dưới đây là phương pháp phát hiện chi tiết của sắc ký lỏng hiệu suất cao (HPLC) đối với 4-metylimidazol trong màu điều.

1rồng hổ, Thiết bị và hóa chất

1.1 Thiết bị

Máy sắc ký lỏng LC-10Tvp

Cột Vertex: 150mm x 4.6mm x 5µm

Cân phân tích

Máy cô đặc quay

Thùng phân phối 250ml

Máy lắc rung

Bộ lọc kim loại

Màng lọc vi: 0.45µm

1.2 Hóa chất

Methanol (tinh khiết sắc ký)

Ethanol vô nước

Cloform

Dung dịch trích ly cloform-etanol vô thủy (80: 20): Lấy 80 ml cloform và 20 ml etanol vô thủygiải mộng, trộn đều và dự trữ.

Natri cacbonat

Dung dịch natri cacbonat (100 g/L): Chia chính xác 100 gam natri cacbonat vào bình định mức 1000 mlkèo tỷ số bóng đá hôm nay, thêm nước đến mực vạch.

Natri p-toluenesulfonat

Kali acid phosphoric

Phosphoric axit

Dung dịch đệm kali dihydrogen photphat (0.05 mol/L): Cân 6.8g kali dihydrogen photphat và 1g sulfat heptyl metan sulfonic vào bình định mức 1000 mlgiải mộng, thêm 900 ml nước, điều chỉnh pH bằng axit photphoric loãng đến 3.5, sau đó thêm nước đến mực vạch.

Chuẩn 4-metylimidazol: độ tinh khiết >99%

Dung dịch chuẩn dự trữ 4-metylimidazol: Cân chính xác 0.1000 g 4-metylimidazol vào bình định mức 100 mlkèo tỷ số bóng đá hôm nay, hòa tan và định mức bằng dung môi chảy, đạt nồng độ 1.0 mg/ml, làm dung dịch dự trữ.

2rồng hổ, Chuẩn bị dung dịch mẫu

Cân chính xác 3g mẫu (độ chính xác đến 0.001g)rồng hổ, hòa tan trong 15ml nước, chuyển vào cốc phân ly 250ml, thêm 15ml dung dịch natri cacbonat 100g/L, thêm 60ml dung dịch trích ly cloform-etanol, lắc mạnh trong 5 phút. Sau khi phân tầng, chuyển phần hữu cơ vào cốc phân ly khác, phần nước tiếp tục trích ly lần thứ hai theo cách tương tự, hợp nhất các phần hữu cơ; rửa dung dịch trích ly 3 lần bằng dung dịch natri cacbonat 100g/L, mỗi lần 30ml. Sau đó, lọc dung dịch hữu cơ qua than sunfat vô thủy vào bình cô quay, cô khô ở 50°C, lấy ra, hòa tan cặn trong nước và định mức đến 10ml, lọc qua màng vi lỗ 0.45µm trước khi phân tích bằng HPLC.

3, Điều kiện sắc ký

Cột: C18giải mộng, 4.6 mm x 250 mm, kích thước hạt 5 µm

Dung môi: Methanol: Dung dịch đệm kali dihydrogen photphat 0.05 mol/L (pH 3.5rồng hổ, chứa 0.1% sulfat heptyl metan) = 5: 95

Bước sóng: 210nm

Lưu lượng: 1.0 mL/phút

4, Xác định mẫu

Đường chuẩn: Pha chế một loạt dung dịch chuẩn từ dung dịch chuẩn 4-metylimidazolrồng hổ, tiến hành phân tích HPLC từng dung dịch chuẩn 10µL, sau đó vẽ đường chuẩn với diện tích đỉnh làm trục tung và nồng độ 4-metylimidazol làm trục hoành.

Phân tích mẫu: Lấy 10µL dung dịch mẫurồng hổ, phân tích bằng HPLC, đo diện tích đỉnh, tra bảng chuẩn để xác định hàm lượng 4-metylimidazol trong dung dịch thử.

5, Đồ thị sắc ký

Trở lại